相对定量 (mRNA表达量分析):基因表达的研究一般采用相对定量的方法。相对定量法必须对样品的目的基因和内参基因同时分别进行定量,然后求出对于内参基因的目的基因的相对量。通过对样品间的目的基因的相对量进行比较,可以对不同样品间的mRNA进行表达量分析。内参基因通常选用表达量相对恒定的Housekeeping Gene,如:GAPDH、β-actin等。通过同时对内参基因的实时检测,可以对样品之间由于起始细胞数不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量误差进行校正,达到在严格意义上对样品之间的mRNA表达量进行分析之目的。
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,随着扩增循环数的增加,释放出来的荧光基团不断积累,因此荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
服务价格
服务编号 |
服务内容 |
价格 |
CWS022 |
合成探针 |
¥2000/条 |
CWS027 |
样品检测 |
¥298/样品•基因 |
服务内容
以荧光定量PCR方法对样本基因表达进行相对定量。
服务优势
·先进的仪器,优质的试剂,专业的团队,实验结果更可靠。
·免费设计优化引物,使定量PCR反应扩增效率达到90%以上,使相对定量结果更可靠。
样品要求
客户需提供组织、细胞、血液等样品材料,或纯化好的总RNA或总DNA,反转录好的cDNA样品,具体要求如下:
材料种类 |
样品要求 |
起始量 |
血液 |
新鲜血液及抗凝剂处理的全血 |
1ml |
培养细胞 |
离心收集的细胞 |
1x107 |
动物组织 |
一般材料 |
100mg |
植物 |
一般材料 |
100mg |
RNA | OD260/OD280在1.9-2.1之间,完整性好 | >1ug |
DNA | OD260/OD280在1.7-1.9之间,完整性好 | >1ug |
cDNA | 内参基因检测成功 | >20ul |
终产品
·目的基因剩余引物 (上游引物和下游引物,合成量≥2OD);
·目的基因引物序列;
·相对定量实验报告;
·剩余探针。
服务说明
·客户提供基因序列。
·以上报价是以提取的核酸(DNA或cDNA)为起始材料设定的,如果需要进行核酸纯化,费用另计。
·如因实验材料等非本公司原因造成某实验步骤失败,使实验提前终止,已启动的实验项目仍正常收费。
·公司还提供绝对定量服务,客户需提供标准品,若需制备标准品,费用另计。