DNA CpG甲基化检测—BSP法

　　DNA甲基化是一种表观遗传修饰，它是由DNA甲基转移酶（DNA methyl-transferase, Dnmt）催化S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体，将胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶（mC）的一种反应，在真核生物DNA中，5-甲基胞嘧啶是唯一存在的化学性修饰碱基。CG二核苷酸是最主要的甲基化位点，它在基因组中呈不均匀分布，存在高甲基化、低甲基化和非甲基化的区域，在哺乳动物中mC约占C总量的2－7％。一般说来，DNA的甲基化会抑制基因的表达。DNA的甲基化对维持染色体的结构、X染色体的失活、基因印记和肿瘤的发生发展都起重要的作用。
　　BSP法原理：用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶（C）被转化为尿嘧啶（U）而甲基化的胞嘧啶则不变。基因组DNA经亚硫酸盐处理后，设计BSP引物扩增目的片段，此时尿嘧啶（U）全部转化为胸腺嘧啶（T），最后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化。

服务价格

服务内容
　　1. 基因组DNA的Bisulfite转化。
　　2. BSP（Bisulfite Sequencing PCR）法，PCR产物直接测序，包括引物设计，不包括合成。

样品要求
　　·若提供基因组DNA，需≥2ug。
　　·若提供的材料为新鲜组织、血液、细胞等生物材料，请提供足够提取2ug以上基因DNA的材料量。
　　·基于所选择的DNA甲基化检测方法，请提供相应的引物或引物序列。

终产品
　　·Bisulfite处理的基因组DNA；
　　·实验报告(包括BSP产物的直接测序报告)。

服务说明
　　·在基于Bisulfite 转化的DNA甲基化检测的方法中，引物是决定实验成败的关键因素，且视期望检测的目的基因片段的不同，适宜引物的存在与否有较大的不确定性，请尽量采用其可行性经过验证的引物，如因引物等非本公司原因导致某实验步骤失败，使服务提前终止，已启动的实验项目正常收费。若需DNA甲基化检测用引物设计服务，价格另议。
　　·视BSP产物序列的不同，采用直接检测有可能导致实验结果的可靠性降低；视BSP引物特异性的不同，BSP产物的克隆测序存在插入片段与目的片段不符合的可能性，建议选择同时对多个克隆（>15个）进行测序，以获得足够的数据用于后期分析，最后提供客户5个有效克隆测序结果。